TTC法根系活力的测定实验

原理

氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化还原电位为80毫伏的氧化还原物质。溶于水中为无色溶液，但还原后通过下列反应，生成红色而不溶于水的三苯基甲臢。反应式如下：　

生成的甲臜呈稳定的红色，不会被空气中的氧自动氧化。所以TTC被广泛地用作酶试验的受氢体。植物根引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到加强；而被丙二酸、碘乙酸所严重抑制。所以，它能够测定脱氢酶的活性。由该酶活性表示根系活力。

材料与仪器

水培或砂培的玉米或小麦根植物材料（需洗净）

美析UV-1500PC紫外分光光度计

玉米 小麦根

乙酸乙酯 连二亚硫酸钠  1%TTC溶液

0.1 M  pH7.5磷酸缓冲液   2N硫酸

 温箱 研钵 漏斗 移液管 容量瓶

实验步骤

TTC标准曲线制作：

取0.2  ml  0.5%的TTC溶液加入到10  ml 具塞刻度试管中，再加入少许Na₂S₂O₄粉末，摇匀后即产生红色的甲臜。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。然后分别取此液0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 ml 至10 ml 具塞刻度试管中，以乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲臜 0.025、0.05、0.10、0.15、0.20毫克的标准比色系列。以空白作参比，在485nm0波长下测定光密度，绘制标准曲线。

定性测定方法

取样品0.25g放入三角瓶，加入0.5%TTC溶液和0.1 M 磷酸缓冲液（pH7.5）各5  ml 充分混匀，并将根尖完quan浸入在溶液中，至37℃保温箱内1小时，保温时间一到立即加入2N H2SO4溶液2  ml 以终止反应。如根尖显红色表明该处具有活跃的脱氢酶存在。

定量测定方法

取出定性显色的根段，用滤纸吸干外附水分，至研钵中，加乙酸乙酯3－4  ml 研磨。将提取的红色TTF小心倒入刻度试管中，残渣用乙酸乙酯冲洗2－3次，直至洗液不带红色为止，全部洗液合并于试管中，hou用乙酸乙酯定容至10  ml ；摇匀后，以乙酸乙酯为对照于485n M 下比色，记录光密度值。查标准曲线，即可求出TTC还原量。

关于美析

美析主营光谱类仪器：可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、原子荧光光度计、ICP-AES、ICP-MS，生命科学仪器：超微量分光光度计、全自动核酸提取仪，目，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的xin实际需求，近期将陆续推出一批全xin的分析类仪器。