紫外分光光度法测定过氧化氢含量

 

 

【原理】

H₂O₂与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H_２SO₄溶解后，在415nm波长下比色测定。在一定范围内，其颜色深浅与H₂O₂浓度呈线性关系。

【仪器和用具】

研钵；移液枪0.2ml和枪头，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；UV-1500型紫外可见分光光度计。

【试剂】

100μmol/L H₂O₂试剂；2mol/L硫酸；5%（W/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

30% H₂O₂指的是过氧化氢溶液的质量比,其密度为1.1g/cm3,而过氧化氢的分子量是34.02,通过这些参数，我们可以推算出30%的过氧化氢的摩尔浓度为9.7mol/L.

    【方法】

1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。

表40-1  测定H₂O₂浓度标准曲线配置表

    待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色。

2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视H₂O₂含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

3.结果计算：

     植物组织中H₂O₂含量(μmol/g Fw)=

式中  C—标准曲线上查得样品中H₂O₂浓度（μmol）；

          V_t—样品提取液总体积（ml）；

          V₁—测定时用样品提取液体积（ml）；

          FW—植物组织鲜重（g）。