微量乙醇是低度果酒，含酒精饮料和调味品等发酵食品中重要的风味物质。目前，对于微量乙醇的测定主要以气相色谱法为主，重铬酸盐氧化分光光度法测定微量乙醇含量，是一种快速准确的测定方法，它具有操作简便，所需分析仪器简单的特点，尤其适用于生产和质检部门的日常分析。

 一、测定原理 

在酸性溶液中，乙醇可被重铬酸氧化生成乙酸，重铬酸钾中的六价铬被还原成三价铬，其反应式为： 3C2H5OH+2K2Cr2O7+8H2SO4=3CH3COOH+2K2SO4+2Cr2(SO4)+11H2O 

反应中生成的三价铬为绿色，它在585nm处有吸收峰，且溶液颜色的深浅与乙醇含量成正比，可以在分光光度计上比色，通过与标准系列进行比较进行定量。

 二、仪器与试剂 

1、  UV-1300紫外可见分光光度计（美析仪器）

2、   蒸馏装置 

3、PHS—3C酸度计

4、乙醇标准溶液：准确吸取2.00mlGR级无水乙醇，置于预先装有少量蒸馏水的100ml容量瓶中，混匀，加水定容至刻度，摇匀备用。 

5、重铬酸钾溶液，称取10.00gAR级K2Cr2O7，用少量水溶解，并定容至250ml。

 6、浓硫酸：AR级，含量95~98%。

 7、1%溴百里酚蓝指示剂 

8、  NaoH溶液：C(NaoH)=1.0mol/L   

 三、测定方法 

1、标准曲线的绘制 

取7支25mlA级比色管，各加入2.00ml重铬酸钾溶液和2.50ml浓H2SO4，混匀，并冷却，依次加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00和1.25ml乙醇标准溶液，混匀，反应10分钟后加水至刻度，再次混匀，以0号管调零，于585nm波长处分别测定其吸光度，绘制标准曲线。 表1      标准曲线的绘制    （L=10mm） 

乙醇含量ul/25ml    0.00          4.00          8.00       12.00         16.00       20.00        25.00 

吸光度                  0.000        0.075         0.146         0.221         0.292         0.366          0.454         回归方程为：y=55.23x-0.1367      相关系数  r=0.99997

 2、样品的制备 

准确移取100.00ml样品于250ml蒸馏烧瓶中,加入25mH2O,再加数滴溴百里酚蓝指示剂，用NaoH溶液滴定至蓝色（深色样品用酸度计指示中和至中性），加几粒沸石，连接好蒸馏装置进行蒸馏，馏出液用100ml容量瓶收集，接收瓶用冰浴进行冷却，缓慢蒸馏至接近刻度时取下，放入20℃水浴中30分钟，用H2O定容至刻度，摇匀，备用。

 3、样品的测定 

取1.00ml制备好的样品，按标准曲线绘制的方法进行测定，利用回归方程计算出样品中乙醇的含量。

 四、结果与讨论

 1、波长的选择 

吸取1.25ml乙醇标准溶液按上述测定方法进行操作，并在400~800nm波长范围内对样液进行扫描，扫描结果表明，该体系在585nm波长随近有吸收峰，并且试剂空白值在该波长处很低，故选择λ=585nm作为测定波长。

 2、浓H2SO4用量对吸光度的影响 

浓度H2SO4用量（ml） 0.60         0.80        1.00         1.50         2.00        2.50        3.00 

吸光度                  0.226        0.236        0.244        0.263        0.280        0.292         0.294 

按反应式计算，确保2.00ml重铬酸钾溶液全部参加反应，约需0.6ml98%的浓H2SO4，实际工作中，为确保反应迅速、彻底，浓H2SO4用量常常过量。在固定重铬酸钾溶液用量和反应时间的前提下，在一定范围内混合体系的吸光度随浓H2SO4用量的增加而增加，当浓H2SO4用量超过2.50ml时，吸光度趋于稳定，故选择浓H2SO4用量为2.50ml。 

3、显色时间与稳定时间 

时间（分钟）          10            40           60               120             360 

吸光度①            0.074           0.074          0.073            0.073           0.073 

②            0.145            0.144        0.144           0.143           0.143         按照试验方法测定同一样液在不同时间的吸光度值，结果表明，混合体系的吸光度在显色10分钟后至至少6小时以内基本保持稳定。 4、方法精密度 

测定次数           1          2         3         4          5          6        X        Cv 

测定结果（%）   1.45      1.42     1.44       1.45      1.47     1.45     1.45     1.12         对麦精啤露样品重复6次测定，变异系数为1.12% 5、灵敏度与线性范围 

该分析方法的检出限为0.05%，乙醇含量在0~25ul/25ml范围内呈显著的线性关系。  

6、样品测定及回收率     （n=3） 

样 品           样品测定值（%）         加入量（%）         测定值（%）         回收率（%）

 麦精啤露            1.45                       0.75                    2.18                 97.3

 糯米饮料            1.42                       0.50                    1.92                    100.0 

酱     油             0.67                       0.50                    1.15                    96.0 

山葡萄酒            3.86                       0.75                    4.60                    98.7                                                                                           

用本方法对监督检验抽取的含酒精饮料、酱油、低度山葡萄酒等多组样品进行测定，加标回收率在96.0~100%之间，测定结果令人满意