1 实验目的
    (1) 学习紫外分光光度法的基本原理及定量分析方法。
    (2) 掌握紫外-可见分光光谱仪的基本结构和一般操作。
 
2 实验原理
在紫外分光光度分析中，常用波长为200～400 nm的近紫外光。当有机物分子受到紫外光辐射时，分子中的价电子或外层电子能吸收紫外光而发生能级间的跃迁，其吸收峰的位置与有机物分子的结构有关，其吸收强度遵循朗伯-比尔定律，与有机物的浓度有关。
    苯酚是一种重要的化工原料，也是一种可致癌的有机污染物。苯酚主要用于合成酚醛树脂，在某些药品、添加剂和增塑剂中也有应用。其水溶液在紫外光区197 nm、210 nm和270 nm附近有吸收峰，其中在270 nm处的吸收峰较强。
    因玻璃比色皿在紫外区有吸收，故要用不吸收紫外光的石英比色皿。

3 实验步骤
(1) 苯酚标准溶液的配制
   称取0.1000 g分析纯苯酚，用蒸馏水溶解后转移至100 mL容量瓶中定容，移取5.00 mL于另一100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，置于冰箱中保存，此溶液含苯酚50 μg·mL-1。
(2) 仪器的准备
    按紫外-可见分光光谱仪说明书操作。开启仪器和计算机电源，进入操作界面，选定工作参数（狭缝宽度、扫描范围、扫描速度等）。关闭钨灯或卤钨灯（可见光源），打开氢灯或氘灯（紫外光源），作好测样准备。
(3)吸收波长的测定
    移取苯酚标准溶液2.00 mL于25 mL容量瓶中，定容，摇匀，取适量倒入石英比色皿中，以蒸馏水为参比溶液，在波长200～400 nm范围内进行扫描，得到吸收曲线，由吸收曲线确定吸收波长（λmax）。
(4) 标准曲线及样品的测定
    在6个25 mL容量瓶中，分别加入0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL的苯酚标准溶液，用蒸馏水定容。在λmax处测定各溶液的吸光度值，同时测定含苯酚水样（调整至合适浓度且溶液澄清）的吸光度值，由仪器打印出标准曲线及样品的测定结果。

4 注意事项
    (1) 按照仪器的使用说明书操作仪器。
    (2) 玻璃比色皿在紫外区有吸收，要用石英比色皿。取用比色皿时，手不能接触透光面。
    (3) 对含苯酚水样应进行预处理，使其溶液澄清、浓度在标准曲线范围内。
    (4) 需要时，苯酚标准溶液的浓度可用标准硫代硫酸钠溶液来标定。

5 问题讨论
    (1) 简述紫外分光光度法的特点及适用范围。
    (2) 紫外分光光度法用于定量分析的依据是什么？

6 参考答案 
   （1） 简述紫外分光光度法的特点及适用范围。
    答：紫外分光光度法，又称紫外吸收光谱法，它主要研究分子在190～400 nm波长范围内的吸收光谱。其吸收光谱主要产生于分子中价电子或外层电子在电子能级间的跃迁。通过测定分子对紫外光的吸收，可以对大量的无机物和有机物进行定性和定量分析。
    其主要应用范围是:对具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，进行定性和定量分析。
　　(2) 紫外分光光度法用于定量分析的依据是什么？
    答：朗伯-比尔定律。