分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为：（1）200～400nm的紫外光区（2）400～760nm的可见光区,（3）2.5～25μm（按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>）的红外光区。
　　所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。
　　分光光度计是精密光学仪器，正确安装、使用和保养对保持仪器良好的性能和保证测试的准确度有重要作用。
　（1）仪器工作环境的要求
　　分光光度计对工作环境的要求如下：
　　①仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5～35℃．相对湿度不超过85％。
　　②仪器应放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的振动或持续的振动。
　　③室内照明不宜太强，且应避免直射日光的照射。
　　④电扇不宜直接向仪器吹风，以防止光源灯因发光不稳定而影响仪器的正常使用。
　　⑤尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。
　　⑥供给仪器的电源电压为AC220V±22V，频率为50Hz±1Hz，并必须装有良好的接地线。推荐使用功率为1000w以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器，以加强仪器的抗干扰性能。
　　⑦避免在有硫化氢等腐蚀性气体的场所使用。
　　（2）仪器的日常维护和保养
　　①光源。光源的寿命有限，为了延长光源使用寿命，在不使用仪器时不要开光源灯，应尽量减少开关次数。在短时问的工作间隔内可以不关灯。刚关闭的光源灯不能立即重新开启。
　　仪器连续使用时间不应超过3h。若需长时间使用，间歇30min。
　　如果光源灯亮度明显减弱或不稳定，应及时更换新灯。更换后要调节好灯丝位置，不要用手直接接触窗口或灯泡，避免油污沾附。若不小心接触过，要用无水乙醇擦拭。
　　②单色器。单色器是仪器的核心部分，装在密封盒内，不能拆开。选择波长应平衡地转动，不可用力过猛。为防止色散元件受潮生霉，必须定期更换单色器盒干燥剂（硅胶）。若发现干燥剂变色，应立即更换。
　　③吸收池。必须正确使用吸收池，应特别注意保护吸收池的两个光学面。
　　④检测器。光电转换元件不能长时间曝光，且应避免强光照射或受潮积尘。
　　⑤当仪器停止工作时，必须切断电源。
　　⑥为了避免仪器积灰和沾污，在停止工作时，应盖上防尘罩。
　　⑦仪器若暂时不用要定期通电，每次不少于20～30min，以保持整机呈干燥状态，并且维持电子元器件的性能。
　　紫外—可见分光光度计类型
　　紫外一可见分光光度计按使用波长范围可分为：可见分光光度计和紫外一可见分光光度汁两类。前者使用的波长范围为400～780nm；后者使用的波长范围为200～1000nm。
　　按光路紫外一可见分光光度计可分为单光束式及双光束式两类；按测量时提供的波长数又可分为单波长分光光度计和双波长分光光度计两类。
　　所谓单光束是指从光源中发出的光，经过单色器等一系列光学元件及吸收池后，*后照在检测器上时始终为一束光。常用的单光束紫外一可见分光光度计有UV-1100型、UV-1200型、UV-1300型、UV-1400 型、UV-1500型、UV-1700PC 型、UV-1800PC型、 UV-1900PC型等。常用的单光束可见分光光度计有V-1100型、V-1200型、V-1300型、V-1400型V-1500型、 V-1600等。
　　单光束分光光度计的特点是结构简单、价格低，主要适于作定量分析。其不足之处是测定结果受光源强度波动的影响较大，因而给定量分析结果带来较大误差。
　　双光束分光光度计是指从光源中发出的光经过单色器后被一个旋转的扇形反射镜（即切光器）分为强度相等的两束光，分别通过参比溶液和样品溶液。利用另一个与前一个切光器同步的切光器，使两束光在不同时间交替地照在同一个检测器上，通过一个同步信号发生器对来自两个光束的信号加以比较，并将两信号的比值经对数变换后转换为相应的吸光度值。
　　常用的双光束紫外一可见分光光度计有710型、730型、UV-1700PC 型、UV-1800PC型、UV-1900PC型等。这类仪器的特点是：能连续改变波长，自动地比较样品及参比溶液的透光强度，自动消除光源强度变化所引起的误差。对于必须在较宽的波长范围内获得复杂的吸收光谱曲线的分析，此类仪器极为合适。
　　双波长分光光度计与单波长分光光度计的主要区别在于采用双单色器，以同时得到两束波长不同的单色光。光源发出的光分成两束，分别经两个可以自由转动的光栅单色器，得到两束具有不同波长A1和A2的单色光。借切光器，使两束光以一定的时间问隔交替照射到装有试液的吸收池上，由检测器显示出试液在波长λ1和λ2的透射比差值△r或吸光度差值△A，则
　　△A＝Aλ1－Aλ2＝﹙Eλ1－Eλ2）bc
　　由式可知，△A与吸光物质c成正比。这就是双波长分光光度进行定量分析的理论根据。
　　常用的双光束分光光度计有美析UV-1700PC 型、UV-1800PC型、UV-1900PC型、日本岛津UV一300、UV一365等。
　　这类仪器特别适合混合物和浑浊样品的定量分析，准确度高，可进行导数光谱分析等。其不足之处是价格昂贵。