测定饲料中单宁的方案（分光光度法）

引言

目，“饲料禁抗”已成为全球畜牧业生产的趋势，对提高畜产品质量安全、增加绿色优zhi畜产品供给、降低养殖生产成本、促进畜产品出口、实现畜牧业可持续发展意义深远。单宁作为替抗产品在动物生产中的应用具有一定的可行性。

关键词  单宁  分光  美析

原理

用丙酮溶液提取饲料中单宁类化合物,经过滤后,取滤液加钨酸钠-磷钼酸混合溶液和碳酸钠溶液，显色后,以试剂为空白对照,用分光光度计于760 nm波长处测定吸光度值,用单宁酸作标准曲线测定饲料中单宁含量。

仪器及试剂

美析UV-1500紫外可见分光光度计:带10 mm比色皿,可在760 nm处测定。

电子天平:感量为0.1mg.

粉碎机。

振荡仪。

单标线吸管:1 mL,10 mL,50 mL,A。刻度吸管:5mL。

容量瓶:50 mL,100 mL,200 mL,A。具塞三角瓶:250 mL。

中速定量滤纸。

除非另有说明,本标准中所用试剂均为分析纯,水符合GB/T 6682三用水规定。

钨酸钠(Na₂O₄W·2H₂O).

磷钼酸(H₂Mo₁₂O₄₀P·XH₂O)。

钨酸钠-磷钼酸混合溶液:称取100.0g钨酸钠、20.0g磷钼酸,溶于约750 mL水中，移入1000 mL回流瓶中,加入50 mL磷酸,充分混匀,接上冷凝管,在沸水浴上加热回流2h,冷却,转入1000 mL容量瓶中,用水定容至刻度﹐摇匀,过滤﹐置棕色瓶中保存。室温下可保存14 d。

无水碳酸钠(Na₂CO₃)。

碳酸钠溶液(75 g/L):称取37.5 g无水碳酸钠，溶于250 mL温水中,混匀,冷却,稀释至500 mL,过滤到储液瓶中备用。室温下可保存7d.

丙酮(C₃H₆O)。

丙酮溶液(1＋1,体积比):分取等体积的水和丙酮(4.6),等体积混合,摇匀,即得。

单宁酸标准品(C₇₆ H₅₂O₄₆):含量≥95.0%。

单宁酸标准储备液:称取单宁酸标准品适量(精que到0.0001g),加适量水溶解,用水定容至100 mL,摇匀,制成单宁酸质量浓度约为1 mg/mL的标准储备液。在冰箱中4℃可保存5d。

单宁酸标准使用液;精密量取单宁酸标准储备液10.00 mL,置 200 mL容量瓶中,用水定容至200 mL,摇匀。此溶液单宁酸质量浓度为50 mg/L,用时现配。

试样制备

按GB/T 14699.1采样,按GB/T 20195制备试样,磨碎,通过0.45 mm孔筛,混匀,装入密闭容器中,避光低温保存备用。

分析步骤

试液的制备

称取试样1 g~2 g(精que至0.000 1 g),置于250 mL具塞三角瓶中,精密加入丙酮溶液50.00 mL,加塞密封,置振荡仪上振摇40 min,静置,用中速定量滤纸过滤,弃去初滤液,续滤液供测定用。

测定

标准曲线的绘制

精密量取单宁酸标准使用液0.00 mL,0.50 mL,1.00 mL,2.00 mL,3.00 mL,4.00 mL、5.00 mL和6.00 mL,分别置盛有约30 mL水的50 mL容量瓶中,摇匀;加钨酸钠-磷钼酸混合溶液2.5 mL,加碳酸钠溶液5.0 mL,摇匀;分别用水定容至50 mL,播匀。单宁酸标准溶液浓度分别为0.00 mg/L,0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L,3.00 mg/L、4.00 mg/L,5.00 mg/L和6.00 mg/L,放置30 min显色后,以标准曲线0.00 mg/L为空白,在760 nm波长处测定标准溶液的吸光度,以单宁酸浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。

试样的测定

精密量取试液1.00 mL,置盛有约30 mL水的50 mL容量瓶中,摇匀;加钨酸钠-磷钼酸混合溶液2.5 mL,加碳酸钠溶液5.0 mL,摇匀;用水定容至50 mL,摇匀。放置30 min显色后，以标准曲线0.00 mg/L为空白,在760 nm波长处测定试样溶液的吸光度,根据标准曲线求出试液中单宁酸的浓度。如果吸光度值超过6.00 mg/L单宁酸的吸光度时,将试液稀释后重新测定。

计算和结果的表述

试样中单宁(以单宁酸计)的含量X,以质量分数表示,单位为毫克每千克(mg/kg),按式计算。

式中:

c——试样测定液中单宁酸的浓度,单位为毫克每升(mg/L);

v——试样定容体积,单位毫升(mL);

D——试样稀释倍数;

m——试样质量,单位为克(g)。

仪器参数

UV-1500PC紫外可见分光光度计

仪器特点

*采用单片微机控制，128*64位液晶显示

*宽大的液晶显示器可显示多组数据

*巨大的内存空间，可存储多组数据和曲线

*自动调0、调100%功能

*波长自动调节

*光源自动切换，滤色片自动切换

*宽大样品池（5mm～100mm）

*具有多十点标样建标准曲线测量功能

*可通过直接输入K、B因子建立标准曲线进行定量测量

*可直接输入标样和对应浓度值建立标准曲线进行定量测量

*可断电保存测量设置的标准曲线参数

*配备通用并行打印接口，可打印标题栏、测量数据、曲线参数、曲线标准样品点和曲线

*配USB接口

*可通过PC软件控制实现光谱扫描等更精que和灵活的测量要求

技术指标及基本参数

*波长范围： 190～1100nm

*光谱带宽： 2nm

*波长准确度：±0.5nm

*波长重现性：≤0.2nm

*透射比准确度: ±0.3% τ

*透射比重复性：0.15% τ

*杂散光：≤0.05% τ (220nm NaI，340nm NaNO2)

*稳定性： 0.001A/h（500nm预热后）

*测光方式：透过率、吸光度、浓度、能量

*波长调节：自动调节

*光度范围： -0.3～3A

*显示方式： 128*64液晶

*检测器：进口硅光二管

*光源：进口氘灯，进口钨灯

*电源： AC 220V/50Hz或110V/60Hz

*功率： 120W

*仪器尺寸：480×350×220mm

*主机净重： 15Kg

关于美析

美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的xin实际需求，近期将陆续推出一批全xin的分析类仪器